Titel:
ESI FT-CR Massenspektronomie für die Analyse von molekularen Erkennungsmechanismen in regulatorischen Membranproteinen.
Projektleitung an der Universität Würzburg:
Beteiligte Wissenschaftlerinnen und Wissenschaftler:
Kurzbeschreibung:
Die Spezifität, Thermodynamik, und Kinetik von Protein-Protein Interaktionen sind entscheidend für die Signaltransduktion an biologischen Membranen und damit für die Steuerung des Verhaltens, der Differenzierung und der Entwicklung von Zellen. In dem Vorhaben soll eine Massenspektrometrie mit hoher Auflösung und in Massenbereichen bis 100 kDa (ESI FT-ICR-MS) dazu eingesetzt werden, wichtige Aspekte der Erkennungsmechanismen von regulatorischen Membranproteinen aufzuklären. Es ist geplant, rekombinante Rezeptordomänen, Proteinliganden und Signalproteine herzustellen und die Bildung von nichtkovalenten Komplexen zwischen ihnen qualitativ und quantitativ zu untersuchen. Besonders soll ausgelotet werden, (1) welche Voraussetzungen (Affinitäten, Kontaktreste) für den massenspektrometrischen Nachweis der nichtkovalenten Komplexe gegeben sein müssen, (2) inwieweit sich Mutantenproteine mit geändertem Bindungsverhalten identifizieren lassen, und (3) ob sich Konformationsänderungen der Proteine bei der Komplexbildung über Unterschiede in der Ionisierbarkeit nachweisen lassen. Als zweites Hauptprojekt soll geprüft werden, inwieweit sich die Rückfaltung von rekombinanten Proteinen (Renaturierung) mit Hilfe von MS Messungen verfolgen läßt. Es ist beabsichtigt, dafür C13- und N15-abgereicherte Proteine herzustellen und einzusetzen.
Das MS-Projekt soll sich personell und inhaltlich eng an den gerade begutachteten SFB 1756 ("Regulatorische Membranproteine. Vom Erkennungsmechanismus zur pharmakologischen Zielstruktur") anlehnen.
Schlagworte:
Metabolit-Analyse
Massenspektrometrie
Proteomics
Laufzeit: von 01.2000 bis 12.2012
Förderinstitution:
DFG ,Genehmigungsdatum: 25.10.1999
Vorläuferprojekt:
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Publikationen: